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免疫分析常用酶
点击次数:180 发布时间:2019-05-01

免疫分析常用酶

 

酶联免疫分析酶技术具有高敏感性的关键是选用有生物放大作用的酶作为标记物。酶免疫分析中使用的酶要求符合下列一些条件:1酶的纯度高、催化反应的转化速率高、酶作用的专一性强; 2酶蛋白分子具有足够的偶联用标记基团,用各种化学方法与抗原、抗体蛋白分子偶联处理后,仍保持较高的催化活性;3使用稳定性和保存稳定性好;4测定酶活性的方法要求简便、灵敏、快速;5待测体液中不应存在与标记酶相同的酶,以防干扰任用;6待测溶液中应无底物、反应抑制剂和其他干扰因素存在;7酶的来源、纯化和供应较方便,8均相酶免疫测定法中使用的酶,还要求当抗体与半抗原-酶结合物结合后,酶的活性表现出抑制或激活。

在实验中目前最常用的示踪酶有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶以及葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶等。其中,根据分子量的大小及酶反应性的特点,在固相或非固相酶标免疫测定时应加以选择。

在酶联免疫分析技术中,由于酶标复合物常通过细胞膜进入细胞内与靶分子结合,因此所用的标记应选择分子量低而酶活性高的酶类。在标记酶的质量评价中,通常需要两个指标:一个是RZ比值,另一个是活性单位。RZ表示酶的纯度,即酶蛋白中活性部分与非活性部分最大吸光度的比值。通常根据酶的物理化学性质来确定它是否适合作标记物。与各向异性标记物相比,酶有多种测定方法,而且通过二级放大还可测定分子量很小的酶,这说明酶是一类通用的标记物,可以在各种分析中广泛应用,从简易的操作到高灵敏的自动化程序,因此,酶是一种优良标记物,但酶比荧光化合物或化学发光化合物更易受到环境因素的影响而失活。此外酶免疫分析法在低检测限或检测范围方面的局限性有待进一步改进,但是这种局限性可以通过选择终点测定法来消除。

 

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