平安彩票

当前位置:
首页 > 技术文章 > β-兴奋类快速检测试剂盒说明书
目录导航 Directory
服务热线
技术支持Article
β-兴奋类快速检测试剂盒说明书
点击次数:184 发布时间:2019-03-22

EF33B\J2                  

 

  β-兴奋快速检测试剂盒说明书

一、原理

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的β-兴奋类药物将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗β-兴奋类药抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光值与其所含β-兴奋类药物的含量成负相关,与标准曲线比较即可得出相应β-兴奋类药物的含量。

二、试剂盒特性

  1. 试剂盒灵敏度:   0.1ppb
  2. 孵育温度:       25℃
  3. 孵育时间:       30min~15min
  4. 样本检测下限

猪   尿 ··········································  0.3ppb

猪   肉 ··········································  0.6ppb

  1. 交叉反应率

克伦特罗(Clenbuterol)·························  100%

西马特罗(Cimaterol)   ·······················  <4%  

溴布特罗(Brombuterol)   ······················  60%

马布特罗(Mabuterol)  ·························  108%

班布特罗(Bambuterol)  ······················   <5%

氯丙那林(Clorprenaline)  ·····················  <1%

沙丁胺醇(Salbutamol)  ·························  75%

特布他林(Terbutaline )  ······················  25%

喷布特罗(Penbutolol)  ·························  19%

妥布特罗(Tulobuterol)  ························  23%

菲诺特罗(Fenoterol)  ····························<0.1%

莱克多巴胺(Ractopamine) ······················ <0.1%

  1. 样本回收率

猪 尿、猪 肉  ····························  90%±30%

三、试剂盒组成

1

微量测试孔

每条8孔,一板12条

2

标准液×6瓶

(1ml/瓶)

0ppb

0.1ppb

0.3ppb

0.9ppb

2.7ppb

8.1ppb

3

酶标记物

7ml

红色帽

4

抗体工作液

10ml

蓝色帽

5

底物A液

7ml

白色帽

6

底物B液

7ml

黑色帽

7

终止液

7ml

黄色帽

8

20X浓缩洗涤液

40ml

白色帽

9

5X样本提取液

50ml

透明帽

四、所用仪器、试剂

具备的仪器:酶标仪、离心机、恒温箱、打印机

微量移液器:单道 20~200µl、单道100~1000µl、多道 30~300 µl

试      剂:氢氧化钠、浓盐酸

五、样本前处理步骤

  1. 样本处理前须知

(a)实验中必须使用一次性吸头,吸取不同试剂时要更换吸头。

   (b)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。

  1. 样本前处理需配制:

配液1   0.2M 盐酸

取 17.2ml 浓盐酸加去离子水定容至 1L。

配液2   1M 氢氧化钠

    称取4g 氢氧化钠固体加去离子水定溶至    

    100ml。

配液3   样本提取液

    5X样本提取液用去离子水1:4稀释。

  1. 样本处理:

(a)猪肉样本的处理方法

  1. 称取 2 ± 0.05g 均质后的组织于50ml离心管中,加入3ml 0.2M盐酸(见配液1),充分振荡3min。
  2. 再加入600ul 1M 氢氧化钠(见配液2)溶液和2.4ml 样本提取液(见配液3)溶液,充分振荡3min,室温4000r/min 以上离心10min。
  3. 取20 µl上层液体用于分析。(注:离心后若有脂肪层,去除脂肪层或拨开脂肪层,取清澈液体进行分析)。

样本稀释倍数:  4倍

(b)猪尿样本的处理方法

取20µl清亮尿样直接测定(如果尿样浑浊一定

要过滤或4000r/min离心10min,直至得到清亮

尿样),暂不使用的样本应冷冻保存。

样本稀释倍数:  1倍

六、 酶标免疫分析程序:

  1. 测定前应须知:
  1. 使用前将需用试剂和板条的温度回升至室温(20~25℃)。
  2. 使用之后立即将所有试剂放回2~8℃。
  3. 在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
  4. 所有恒温孵育过程,避免光线照射,用盖板膜盖住微孔板。
  1. 操作步骤:
  1. 从2~8℃冷藏环境中取出所需试剂,室温(20~25℃)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
  2. 取出框架及需要数量的微孔,将不用的微孔放入自封袋,保存于2~8℃。
  3. 配液:将 40ml浓缩洗涤液(20 倍浓缩)用去离子水按照 1:19 稀释(1 份浓缩洗涤液+19 份去离子水),或按所需用量配制洗涤液。
  4. 编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
  5. 加标准品/样本20µl/孔到各自的微孔中,加入酶标记物50µl/孔,然后加入80µl/孔的抗体工作液,用盖板膜盖板,轻轻振荡混匀,25℃环境反应30min
  6. 将孔内液体甩干,用洗涤液250µl/孔洗板4~5次,每次间隔15~30秒,用吸水纸拍干(拍干后未清除的气泡可用干净的枪头刺破)。
  7. 显色:加入底物A液50µl/孔,再加入底物B液50µl/孔,轻轻振荡混匀,25℃环境中避光显色15min
  8. 测定:加入终止液50µl/孔,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测,5min内读数),测定每孔OD值。

七、结果判定

结果判定有两种方法,粗略判定可用第1种方法,定量判定用第2种方法。注意样本吸光度值与其所含β-兴奋量成负相关。

1、粗略判定:

用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ng/ml)。假设样本1的吸光度值为0.3,样本2的吸光度值为1.0,标准液吸光度值分别是:0ppb为2.243; 0.1ppb为1.816;0.3ppb为1.415;0.9ppb为0.74;2.7ppb为0.313;8.1ppb为0.155。则样本1的浓度范围是2.7ppb~8.1ppb;样本2的浓度范围是0.3ppb~0.9ppb,乘以其对应的稀释倍数即为样本中β-兴奋类药物实际浓度。

2、定量分析

(1)百分吸光率的计算,标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值(双孔)除以第一个标准(0标准)的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光率(%)=

B

×100%

B0

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值

(2)标准曲线的绘制与计算

以标准品百分吸光率为纵坐标,以β-兴奋标准品浓度(ng/ml)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中β-兴奋类药物实际浓度。

若利用试剂盒专业分析软件进行计算,更便于大量样本的准确、快速分析。( 索取)

八、 注意事项

  1. 室温低于25℃或试剂及标本未回到室温(20~25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
  2. 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会伴随着标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
  3. 混合要均匀,否则会出现重复性不好的现象。
  4. 反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。
  5. 不要使用过了有效日期的试剂盒;稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值变化;不要交换使用不同批号的盒中试剂。
  6. 不用的微孔板放进自封袋重新密封;标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
  7. 显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之。标准品1的吸光度值小于0.5时,表示试剂可能变质。
  8. 该试剂盒理想反应温度为25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

九、储藏条件和保质期

  1. 储藏条件:试剂盒于2-8℃保存,不要冷冻。
  2. 保 质 期:该产品有效期为1年,生产日期见包装盒。

提示:酶标板真空包装袋若有漏气,酶标板仍然正常有效,不影响实验结果,请放心使用。

 

孔雀石绿(0.05ppb)                神经HRP示踪显色液(TMB法)说明书

人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞(CCRF-CEM)培养说明书

联系人
在线客服
用心服务成就您我

沪公网安备 31011802001676号

友情链接:98彩票官网  大发彩票官网  云鼎彩票  澳彩网彩票  大发彩票  98彩票  金巴黎彩票官网  云鼎彩票  

免责声明: 本站资料及图片来源互联网文章,本网不承担任何由内容信息所引起的争议和法律责任。所有作品版权归原创作者所有,与本站立场无关,如用户分享不慎侵犯了您的权益,请联系我们告知,我们将做删除处理!